質粒(Plasmid)—— 基因工程中最常見的運載體。是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區DNA原有的能夠自主復制的較小的DNA分子(即細胞附殖粒、又胞附殖粒)。絕大多數質粒是閉合環狀的雙鏈DNA分子。
質粒載體是在天然質粒的基礎上為適應實驗室操作而進行人工構建的質粒。與天然質粒相比,質粒載體通常帶有一個或一個以上的選擇性標記基因(如抗生素抗性基因)和一個人工合成的含有多個限制性內切酶識別位點的多克隆位點序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量盡可能減少,以便于基因工程操作。
大量獲取質??梢酝ㄟ^質粒擴增的方式,其方法通常包括將細菌質粒轉化到大腸桿菌(感受態)中,然后借助大腸桿菌的搖菌擴增實現質粒的擴增,再通過抽提的方式收獲大量質粒。質粒擴增需要的源頭質粒量非常小,1ug的質粒已經能夠滿足擴增的需要,這也使得質粒的重復使用變得非常容易,因此質粒發貨后無序列問題不退不換。
質粒DNA示意圖