報告基因檢測是現代分子生物學研究領域中分析結構基因旁側區域潛在的順式元件(如啟動子、增強子和沉默子等)和反式作用因子相互作用關系的一種重要工具。吉滿生物生產的雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒(Dual Luciferase Reporter Gene Aassy Kit),是一種結合螢火蟲和海腎熒光素酶檢測的先進輔助報告基因技術。
雖然螢火蟲和海腎熒光素酶都具有生物發光報告基因的檢測特點,但它們卻具有完全不同的進化起源,因而它們的酶結構和底物要求完全不同。我們利用這一特點,將它們配合起來使用,即可形成十分有效的雙熒光素酶報告基因系統,其中Renilla Luciferase通常作為內對照。
它的實驗原理是先以螢火蟲熒光素(firefly luciferin,以下簡稱熒光素)為底物來檢測細胞中的螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase,以下簡稱熒光素酶)。熒光素酶在ATP,Mg2+和O2參與下催化熒光素,生成氧化熒光素(oxyluciferin),熒光素在被氧化過程中,產生生物發光(Bioluminescence)。然后在后續實驗中抑制該反應,來終止螢火蟲熒光素的生物發光,同時加入海腎熒光素酶(Renilla Luciferase)的底物腔腸素(coelenterazine)。在O2參與下,腔腸素被海腎熒光素酶催化氧化成氧化熒光素(coelenteramide)產生生物發光。然后通過化學發光儀或液閃測定儀測定生物發光。
雙螢光素酶報告基因檢測系統在單螢光素酶報告基因的基礎上引入了“內參對照”報告基因,這樣可以在最大程度上減小細胞數目、細胞生長狀態和轉染效率等外在因素對于實驗的影響,使得實驗結果更為可信。